产品货号：
KFS304
中文名称：
细胞自噬检测试剂盒(IF/ICC法)
英文名称：
产品规格：
100～200T
发货周期：
1～3天
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本试剂盒采用LC3B兔多抗，可以用于荧光显微镜、共聚焦显微镜以及高内涵成像分析。试剂盒同样提供磷酸氯喹以便人为控制自噬体的形成。在磷酸氯喹处理之后，溶酶体pH上升，正常的自噬过程被干扰，形成自噬体累积。
自噬是由Ashford和Porter在1963年发现细胞内有“自己吃自己”的现象后提出的概念。它是指细胞内，从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等成分形成自噬体(autophagosome)，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物的过程。自噬对于细胞自身的代谢和某些细胞器的更新有着重要意义。
LC3B蛋白在自噬活动中起着重要作用，通常情况下，LC3B蛋白驻留于细胞质中，但随着磷脂酰乙醇胺的分解和脂化，LC3蛋白与吞噬泡作用，这一特性已成为自噬体膜上的通用标志。
| 组分 | 规格 | |
| LC3B兔多抗(0.5mg/mL) | 100μL | |
| 磷酸氯喹(30mM) | 200μL | |
| 选一种 | FITC标记羊抗兔IgG(1mg/mL) | 100μL |
| 罗丹明标记羊抗兔IgG(1mg/mL) | 100μL | |
保存：2～8℃，避光，有效期1年。
PBS(pH7.2～7.6)，固定液(如：3.7%甲醛/PBS)，促渗剂(如：0.2% Triton X-100/PBS)。
以下操作针对荧光显微镜、高内涵细胞成像分析做了优化，以3.7%甲醛/PBS固定，以0.2%Triton X-100/PBS促渗为例。
- (选做)以50μM工作浓度的磷酸氯喹(chloroquine diphosphate)处理细胞12～16小时。
- 1:100稀释LC3B兔多抗至工作浓度(建议参考值，具体浓度可针对您的实验方案进行优化)。
- 加入3.7%的甲醛/PBS到细胞中，室温孵育15分钟。
- 去除固定液，用PBS洗涤细胞三次。
- 去除洗涤液，加入0.2% Triton X-100/PBS促渗液到细胞中，室温孵育15分钟。
- 去除促渗液，加入1.2步骤中制备好的一抗工作液到细胞中，室温孵育至少1小时。
- 去除抗体孵育液，PBS洗涤细胞三次。
- 去除洗涤液，稀释FITC(或罗丹明)标记羊抗兔IgG至20～5μg/mL，37度避光孵育至少30分钟。
- 以PBS洗涤细胞，进行下游染色(如DNA复染，或其他抗体染色。)
- 显微成像，拍照分析。自噬体是水泡样结构，通常位于核周区域。
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