产品货号：
KFS304
中文名称：
细胞自噬检测试剂盒(IF/ICC法)
英文名称：
产品规格：
100～200T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
背景资料：
产品组成：
保存：2～8℃，避光，有效期1年。
用户自备：
PBS(pH7.4)，免疫染色固定液，促渗剂(如：0.2% Triton X-100/PBS)。
操作说明：
以下操作针对荧光显微镜、高内涵细胞成像分析做了优化，以3.7%甲醛/PBS固定，以0.2% Triton X-100/PBS促渗为例。
相关搜索：细胞自噬检测试剂盒(IF/ICC法)，细胞自噬检测试剂盒
本试剂盒采用LC3β兔多抗，可以用于荧光显微镜、共聚焦显微镜以及高内涵成像分析。试剂盒同样提供磷酸氯喹(chloroquine diphosphate)以便人为控制自噬体的形成。在磷酸氯喹处理之后，溶酶体pH上升，正常的自噬过程被干扰，形成自噬体累积。
背景资料：
自噬是由Ashford和Porter在1963年发现细胞内有“自己吃自己”的现象后提出的概念。它是指细胞内，从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等成分形成自噬体，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物的过程。自噬对于细胞自身的代谢和某些细胞器的更新有着重要意义。
LC3β蛋白在自噬活动中起着重要作用，通常情况下，LC3β蛋白驻留于细胞质中，但随着磷脂酰乙醇胺的分解和脂化，LC3蛋白与吞噬泡作用，这一特性已成为自噬体膜上的通用标志。
产品组成：
| 组分 | 规格 | |
| LC3B兔多抗(0.5mg/mL) | 100μL | |
| 磷酸氯喹(30mM) | 200μL | |
| 选一种 | FITC标记羊抗兔IgG(1mg/mL) | 100μL |
| 罗丹明标记羊抗兔IgG(1mg/mL) | 100μL | |
保存：2～8℃，避光，有效期1年。
用户自备：
PBS(pH7.4)，免疫染色固定液，促渗剂(如：0.2% Triton X-100/PBS)。
操作说明：
以下操作针对荧光显微镜、高内涵细胞成像分析做了优化，以3.7%甲醛/PBS固定，以0.2% Triton X-100/PBS促渗为例。
- 选做：以50μM工作浓度的磷酸氯喹处理细胞12～16h，此步可以作为阳性对照。
- 将LC3β兔多抗以1:1000稀释至0.5μg/mL的工作浓度。建议参考值，具体浓度可针对您的实验方案进行优化。
- 加入3.7%的甲醛/PBS到细胞中，室温固定15min。
- 去除固定液，用PBS洗涤细胞三次。
- 去除PBS，加入0.2% Triton X-100/PBS促渗液到细胞中，室温孵育15min。
- 去除0.2% Triton X-100/PBS促渗液，加入步骤2中制备好的一抗工作液，室温孵育至少1h。
- 去除抗体孵育液，PBS洗涤细胞三次。
- 去除洗涤液，稀释FITC(或罗丹明)标记羊抗兔IgG至5～20μg/mL，37℃避光孵育至少30min。
- 以PBS洗涤细胞，也可进其他染色(如DNA复染)。
- 显微成像，拍照分析。自噬体是水泡样结构，通常位于核周区域。
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